离体肠肌运动实验报告思考题(机能实验学离体肠实验.docx)

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机能实验学离体肠实验

机能实验学离体肠实验

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机

能

实

验

学

实

验

报

告

课题名称:

传出神经药物对离体肠肌的作用

院　（系）：

韶关学院医学院

专业班级:

2011级临床医学本科班

学生姓名：

符宏展

学　　号：

112

指导教师：

梁俊辉

二○一三年六　月五日

机能实验报告

112

实验类型（打√）:

（基础□　综合□　　设计□）

1、实验预习

实验预习报告内容原则上应包含实验目的、实验原理、实验主要仪器、试剂及实验步骤。

实验目的:

掌握:

1.消化道平滑肌的一般生理特性及某些因素对它的影响。

2.哺乳动物离体器官灌流法。

实验装置和器材:

RM6２4０生物信号采集与处理系统、离体器官恒温灌流仪、氧气瓶、张力换能器、烧杯、滴管等。

实验药物:

蒂罗德溶液、0.01%肾上腺素、0．01％乙酰胆碱、0.01%阿托品、0.1%普萘洛尔、0.1%酚妥拉明等。

实验动物:

家兔

实验原理:

哺乳动物消化道平滑肌具有收缩性、缓慢而不规则的自动节律性、伸展性和对化学、温度及机械牵张刺激较为敏感等生理特性。

消化道平滑肌常保持微弱的持续收缩状态，即有一定的紧张性。

本实验应用不同的化学刺激、神经递质和药品作用于离体平滑肌,以了解其一般生理特性及药物的影响。

家兔小肠平滑肌上存在α、β、Ｍ受体。

α、β受体兴奋可使小肠平滑肌抑制而舒张;Ｍ受体兴奋可使小肠平滑肌兴奋而收缩。

观察乙酰胆碱、阿托品、肾上腺素等传出神经系统药物对离体家兔小肠平滑肌的作用并掌握离体平滑肌的实验方法。

实验方法:

1．仪器的准备：

恒温浴槽的水箱加入适当的水，设置温度为38℃；

2.动物手术：

制备离体肠肌标本；

3.安装实验装置:

肠段置于恒温灌流仪的内槽,下端系在钩上,上端与张力换能器相连。

氧气袋开口的针头插入标本槽下端的橡皮管内,人工加压控制出气量,使气泡呈单个逸出;

４．观察项目：

⑴观察正常小肠平滑肌运动的节律、波形和幅度;

⑵给予０.01％乙酰胆碱2滴，观察收缩曲线的变化;

⑶给予0．01%阿托品2~4滴，观察收缩曲线的变化。

１~２mｉn后再加入乙酰胆碱2滴于浴槽内,观察收缩曲线的变化;

⑷给予0.01%肾上腺素2滴,观察收缩曲线的变化；

⑸给予0.1%普萘洛尔２滴，观察收缩曲线的变化。

２mｉn后加入0.0１%肾上腺素2滴，观察收缩曲线的变化；1min后加入0.1%普萘洛尔２滴,观察收缩曲线的变化;

⑹给予0．1％酚妥拉明2滴，观察收缩曲线的变化。

2ｍｉn后加入0．０1%肾上腺素2滴,观察收缩曲线的变化;1ｍin后加入0．1%酚妥拉明2滴,观察收缩曲线的变化;

⑺同时给予０.１%普萘洛尔2滴和0.1%酚妥拉明2滴,观察收缩曲线的变化;2min后加入0.01％肾上腺素2滴,观察收缩曲线的变化;１ｍｉn后加入０．１%酚妥拉明2滴，观察收缩曲线的变化;1min后加入0.1%普萘洛尔２滴，观察收缩曲线的变化；1ｍｉn后加入0.01%乙酰胆碱，观察收缩曲线的变化；1ｍin后加入0．01%阿托品，观察收缩曲线的变化。

实验注意事项：

⑴在恒温槽内先装水,方可接通电源；

⑵制备肠标本时,动作宜轻柔,勿用手捏,以免损伤肠壁。

冲洗肠管不能用力过猛,避免肠管过于膨胀,影响其正常功能。

标本不宜在空气中暴露过久，以免影响数据的准确性；

⑶供氧时气量要适中,气泡要缓慢、成串、单个为好。

气泡过多肠管受冲击,收缩曲线不稳定；

⑷每次出现效应后，立即用冷蒂罗德溶液冲洗２～３次,再更换热蒂罗德溶液进行下一步实验;

⑸每个步骤要有对照曲线。

注意节律、幅度和紧张度的改变;

⑹实验过程中各仪器参数一经确定,勿随意调动,以免影响数据的准确性。

2、实验操作原始（数据）记录及实验结果的分析

实验时间:

2013年6月5日（星期三　晚上：

00－10：

00）

实验同组人：

马腱明　符宏展朱佛妹叶超群黄小花张鹏黄锦霞

如果实验有数据表格,学生在实验预习时应画好实验数据表格，供实验填写数据。

实验结果:

正常

数据表格

实验

数据

测量

最大收缩力（g）

最小舒张力（g）

平均值（g）

频率

正常

1.539

0.286

0.848

14

实验记录波型

实验一：

乙酰胆碱

数据表格

实验

数据

测量

最大收缩力（g）

最小舒张力（g）

平均值（g）

频率

正常

1.422

0.205

0.679

14

乙酰胆碱

1.737

0.271

0.891

16

实验记录波型

实验二:

阿托品→乙酰胆碱

数据表格

实验

数据

测量

最大收缩力（g）

最小舒张力（g）

平均值（g）

频率

正常

0.696

0.205

0.407

15

阿托品

0.557

0.161

0.290

14

乙酰胆碱

1.033

0.169

0.483

13

实验记录波型

实验三：

肾上腺素

数据表格

实验

数据

测量

最大收缩力（g）

最小舒张力（g）

平均值（g）

频率

正常

1.092

0.161

0.503

13

肾上腺素

0.550

0.147

0.312

15

实验记录波型

实验四:

普萘洛尔→肾上腺素→普萘洛尔

数据表格

实验

数据

测量

最大收缩力（g）

最小舒张力（g）

平均值（g）

频率

正常

1.378

0.191

0.665

13

普萘洛尔

1.004

0.169

0.442

12

肾上腺素

0.703

0.154

0.350

12

普萘洛尔

0.696

0.154

0.335

13

实验记录波型

实验五:

酚妥拉明→肾上腺素→酚妥拉明

数据表格

实验

数据

测量

最大收缩力（g）

最小舒张力（g）

平均值（g）

频率

正常

0.945

0.169

0.447

13

酚妥拉明

1.224

0.161

0.533

13

肾上腺素1

1.026

0.125

0.425

12

肾上腺素2

0.857

0.117

0.351

12

酚妥拉明

0.733

0.110

0.308

13

实验记录波型

实验六：

普萘洛尔＋酚妥拉明→肾上腺素→酚妥拉明→普萘洛尔→乙酰胆碱→阿托品

数据表格

实验

数据

测量

最大收缩力（g）

最小舒张力（g）

平均值（g）

频率

正常

1.085

0.139

0.490

15

普萘洛尔+酚妥拉明

0.821

0.132

0.356

13

肾上腺素1

0.608

0.110

0.279

12

肾上腺素2

0.513

0.095

0.236

13

酚妥拉明

0.491

0.095

0.225

普萘洛尔1

0.462

0.095

0.222

普萘洛尔2

0.322

0.088

0.173

乙酰胆碱

0.242

0.125

0.182

阿托品

0.205

0.103

0.152

实验记录波型

实验结果讨论：

1、 正常情况下,我们观察到离体小肠平滑肌在台氏液中可以自动地、缓慢地收缩，但其节律性很不规则。

小肠平滑肌自律性产生的离子基础尚未完全清楚，目前认为,它的产生可能与细胞膜上生电性钠泵的活动具有波动性有关,当钠泵的活动暂时受抑制时,膜便发生去极化；当钠泵活动恢复时,膜的极化加强,膜电位便又回到原来的水平。

2、在浴槽中加入0.01%乙酰胆碱 （Ａｃh ）2滴后,可见离体肠管活动增强,描记曲线出现收缩频率变快，幅度增加。

出现上述现象的机理，目前认为与消化道平滑肌细胞产生动作电位的离子基础是Ca2＋的内流有关。

乙酰胆碱可与肌膜上的Ｍ受体结合,使得两类通道开放:

一类为电位敏感性Ｃａ2+专用通道，另一类为特异性受体活化Ｃa2+ 专用通道。

前一类通道对Ａｃｈ敏感，小剂量Acｈ即引起开放;后一类通道对Ach相对不敏感,只有大剂量Ａch才会引起开放。

这两类通道开放都使得肌浆中 Cａ2+增高，进而激活肌纤蛋白—肌凝蛋白—ATP系统，使平滑肌收缩,肌张力增加。

3、在正常3８度蒂罗德溶液先滴加阿托品,可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小,这是因为阿托品作为平滑肌肌膜上M受体抗结剂与M受体结合抑制的作用,很快又恢复到正常，可能因为阿托品被稀释或被氧化;1ｍin后再加乙酰胆碱的小肠可见离体肠管活动增强，描记曲线出现幅度增加，但频率下降。

频率下降可能是阿托品的拮抗作用，活动增强,描记曲线出现幅度增加，由于这次实验加的是高浓度的乙酰胆碱溶液,相对于低浓度的阿托品对平滑肌肌膜上M受体竞争性作用占优势,但没有单独使用乙酰胆碱明显。

4、在浴槽中加入0.01％肾上腺素２滴后,可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩频率变慢，幅度减小。

出现上述现象的机理， 目前认为与肠肌细胞膜上存在α和β两中受体，α受体又分为α抑制型受体和α兴奋型受体有关。

肾上腺素作用于α抑制型受体，引起肠肌膜上一种特异性受体活化,使K+外流增多，细胞膜发生超极化,肠肌兴奋性降低,肌张力下降。

同时,肾上腺素还作用于β受体，①它的激活引起肠肌细胞膜中的cAMＰ合成增 多，cＡMP激活肠肌膜及肌浆网上Ｃa２＋泵活动,使肌浆中Ｃa２+浓度降低,亦使肌张力降低；②β 受体激活后还促使K+及Ｃａ2＋外流增加,加速膜的超极化,促进了肠肌肌张力的减低；

5、在浴槽中加入0.1%普萘洛尔2滴,普萘洛尔为非选择性竞争抑制肾上腺素β受体阻滞剂，β受体阻断作用较强,无内在拟交感活性，可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小,与理论不符合,可能是小肠在离休环境下没有体内其他因素作用。

2mｉn后在浴槽中加入0．01％肾上腺素2滴后，可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩频率变慢，幅度减小，但没有单独使用肾上腺素明显。

1ｍin后在浴槽中加入０.1%普萘洛尔2滴,可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率增加，幅度减小。

出现上述现象的机理,普萘洛尔阻断了肾上腺素对β受体的兴奋作用，从而减弱了肾上腺素对小肠平滑肌的抑制作用,可能小肠的β受体已完全被阻滞剂。

6、在浴槽中加入0.1%酚妥拉明2滴，酚妥拉明为α肾上腺素受体阻滞药，对α1与α2受体均有作用,有拟胆碱作用,使胃肠平滑肌兴奋,可见离体肠管活动增强，描记曲线出现收缩幅度增加。

2miｎ后在浴槽中加入0.01%肾上腺素2滴,可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小，但没有单独使用肾上腺素明显,也没有使用普萘洛尔后加肾上腺素明显。

１min后在浴槽中加入0．1%普萘洛尔2滴，可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩频率增加，幅度减小。

出现上述现象的机理,酚妥拉明阻断了肾上腺素对α受体的兴奋作用，有拟胆碱作用，使胃肠平滑肌兴奋，从而减弱了肾上腺素对小肠平滑肌的抑制作用，可能小肠的α受体已完全被阻滞剂。

7、在浴槽中同时加入0.1%普萘洛尔2滴和0.1%酚妥拉明2滴，可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率变慢，幅度减小。

２mｉｎ后在浴槽中加入0．01％肾上腺素2滴,可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小。

1mｉn在浴槽中同时加入0.1％酚妥拉明2滴,可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小。

１min后在浴槽中同时加入0．1%普萘洛尔2滴，可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小。

１min后在浴槽中同时加入0．1%普萘洛尔２滴，可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小。

1min后在浴槽中同时加入0.０1%乙酰胆碱 ，可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现直线,幅度减小。

1ｍin后在浴槽中同时加入阿托品 ，可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现直线,幅度减小。

出现上述现象的机理,普萘洛尔阻断了肾上腺素对β受体的兴奋作用，酚妥拉明阻断了肾上腺素对α受体的兴奋作用，从而减弱了肾上腺素对小肠平滑肌的抑制作用,可能小肠的β受体已完全被阻滞剂，可能小肠的α受体已完全被阻滞剂;在浴槽中同时加入０.０１%乙酰胆碱后描记曲线出现直线，可能是小肠平滑肌收缩疲劳或者出现强直收缩,还有可能是乙酰胆碱浓度过高，出现乙酰胆碱中毒；在浴槽中同时加入阿托品后，不能解除乙酰胆碱中毒现象。

实验结论：

1、乙酰胆碱有兴奋小肠平滑肌M受体作用,便小肠收缩力增强，收缩频率加快。

2、阿托品有拮抗乙酰胆碱的作用，便乙酰胆碱作用减弱。

3、肾上腺素可兴奋小肠平滑肌α受体和β受体作用,便小肠收缩力减弱,收缩频率减慢。

4、普萘洛尔有非选择性竞争抑制肾上腺素β受体阻滞作用,便肾上腺素对小肠的作用减弱。

5、酚妥拉明有α受体阻滞作用,便肾上腺素对小肠的作用减弱。

6、肾上腺素对小肠的β受体兴奋占优势。

实验思考：

１、试比较维持哺乳动物离体小肠平滑肌活动和维持离体蟾蜍心脏活动所需的条件有何不同?

为什么？

答:

心脏使用的是任氏液，而哺乳动物小肠使用的是蒂罗德溶液,心脏可以直接暴露在空气中，而小肠需要浸泡再蒂罗德溶液中，心脏可以在普通室温下进行实验，而小肠需要在接近3７℃的水温下且要不断通气才有较为强烈的收缩活动，分析其原因:

1.心脏的养料供给由心血管直接供给，将任氏液直接灌入心脏即可提供养料,而由于暴露在空气中所以不需要另外通空气,而小肠平时的养料由小肠外的肠系膜提供,离体后的小肠直接给肠管通台式液是不行的，必须将其浸泡在台式液中,而浸泡在其中必须通空气提供氧气;2.心脏和小肠本身所处的环境不同,取自的动物种类也不同,故用不同的营养液提供养料；３.心脏是取自变温动物蟾蜍，故不需要保持恒温,而小肠取自哺乳动物家兔,只有在合适的温度时才有活性,故需保持37℃恒温。

２、制备小肠平滑肌标本时,为什么要取小肠上段,尤其是十二指肠段的平滑肌？

答:

小肠各段的自律性不同,上段较高,下端较低。

小肠各段分节运动的频率不同,小肠上部频率较高，下部较低。

电生理研究指出，小肠分节运动的梯度现象与其平滑肌的基本电节律有关。

小肠平滑肌的基本电节律的起步点位于十二指肠近胆管入口处的纵行细胞上,从十二指肠到回肠末端,基本电节律的频率逐渐下降，近端小肠的蠕动速度也大于远端。

所以本实验尽量取小肠上段以利于观察到明显的阳性结果。