间接乳胶凝集试验类风湿因子实验报告

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实验概要

本文以炭疽为例介绍了间接乳胶凝集试验(indirect latex agglutination test)的原理及操作流程。

实验原理

所用乳胶系人工合成的聚苯乙烯乳胶，它是由0.6～0.7μm球形小颗粒组成的胶体溶液，该胶体溶液对高分子蛋白之类的物质具有良好的吸附性能。故在试验时，以其为载体，将炭疽抗体球蛋白吸附在乳胶颗粒表面上，制成所谓的炭疽乳胶诊断血清，当与特异抗原相遇时，乳胶颗粒即被动凝集在一起，在液滴中形成肉眼明显可见的乳胶凝集块，即为阳性反应，如仍为均匀混浊的乳状悬液，则为阴性反应。

主要试剂

聚苯乙烯乳胶、炭疽高免血清、炭疽芽胞抗原、pH值7.2 PBS、pH值8.2 硼酸缓冲液等。

实验步骤

1. 乳胶致敏前的处理：乳胶在致敏前，进行预处理的目的是为了增加乳胶的稳定性，提高其吸附力，减少非特异性凝集。通常按下述方法处理。

取10%乳胶原液1ml，加双蒸馏水4ml稀释成2%，再加pH值8.2 BBS(即硼酸缓冲盐水，由Na2B4O7•H2O 66.7g，H3BO380.4g，NaCl8.5g溶于1000ml双蒸馏水中制成)12ml、1%胰酶溶液(用pH值8.2 BBS配制)2ml，充分混匀，置45℃水浴槽中作用13h，以10000 r/min离心30min，弃去上清，往沉积的乳胶中加入pH值8.2 BBS 10ml，轻轻摇匀，即为1%乳胶悬液。

2. 致敏乳胶血清的制备：以pH值7.2 PBS将炭疽高免血清稀释成1∶20后，在56℃水浴槽中作用30min，取0.2ml缓慢地滴加于1%乳胶悬液1ml中，滴加血清时要边加边振摇，以促进吸附，然后将其置于56℃水浴槽中致敏2h，中间摇动2～3次，再置室温下稳定4h即成。为使致敏的乳胶能长期保存，可加0.1%硫柳汞防腐，置4℃冰箱中保存，其有效期不少于一年，但应注意，绝不能冻结。

对照乳胶正常血清，系以健马血清按上述方法处理乳胶悬液制成。以上两种乳胶血清眼观都呈均匀的乳状，在显微镜下检查，见悬液中有许多均等散在的球状小颗粒，绝无自凝现象，与0.2%NaCl溶液混合时，也不发生凝集。

3. 操作方法：用1ml吸管吸取被检标本液往玻板上分别滴加二滴，每滴0.1ml，再用另1支1ml吸管吸取标准炭疽抗原，也往同一玻板上的另一侧分别滴加二滴，每滴也为0.1ml，再用2支吸管分别往标本滴及炭疽标准抗原滴中滴加炭疽乳胶血清及正常乳胶血清各0.05ml后，用小木棒把上述四个滴液混合均匀，静置于室温下，于5min内按以下标准判定结果。

注意事项

1. 乳胶性质脆弱，易受各种理化学因素的影响发生自凝现象，失去使用价值。为阻止试验中乳胶自凝现象的发生，提高对免疫血清的吸附力，减少制成的乳胶产生非特异性反应，所用乳胶悬液，一律用胰酶处理后再作试验。需要注意的是，处理过的乳胶悬液不能久放，超过3天后应用，吸附血清的能力明显下降。

2. 制备乳胶炭疽血清时，免疫血清的用量必须严格优选，用量过大，如1∶10时，会一定程度地抑制乳胶炭疽血清与特异抗原发生反应，用量过小，不但自身凝集，而且与盐水对照也发生凝集。

3. 被检抗原的处理方法，可直接影响乳胶炭疽血清的检出率。以煮沸杀菌法处理标本较简单，且对结果影响较小。